化学发光成像分析系统

2022-09-02 14:35:56    admin3609

导语：化学发光成像系统可帮助您轻松进行化学发光和荧光成像以及分析免疫印迹。
系统内置软件和单机版分析软件均可进行采集后的图像分析。

Western Blot原理及步骤

Western Blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。它是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

 

原理：

Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

主要的单个过程：蛋白质电泳、转膜、检测。

操作步骤：

蛋白质样品的制备：

1、再合适的盐浓度下，应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。

2、选择合适的表面活性剂和还原剂，破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键，使其形成一个各自多肽的溶液。

3、尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子。

4、放置蛋白质在样品处理过程中认为的修饰，制备过程中应在低温下进行，以避免破坏细胞破碎释放出的各种酶类的修饰（建议加入合适的蛋白酶抑制剂）。

5、样品建议分装成合适的量，然后冷冻干燥或直接以液体的状态-80℃中保存，但注意不要反复冻融。
电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。
转移：（半干式转移）
（1）电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平衡，5min×3次。
（2）膜处理：预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜，浸入转膜缓冲液中10min。
（3）转膜：转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步去除气泡，上压500g重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流1mA/cm2，转移1.5hr。转移结束后，断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。

应用：

Western Blot发应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法，并且是一种能对蛋白质进行定性和半定量的分析方法。是通过特异抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。

 

实验结果：

            

            

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